Bagaimana Kit ELISA berfungsi

Kaedah sandwic antibodi berganda 1. Pakej: Dengan 0.05MPH9. pek karbonat ditimbal untuk mencairkan antibodi kepada kandungan protein 1 hingga 10 ?g/ml. Tambah 0.1 ml, 4 darjah C semalaman, dalam lubang tindak balas setiap plat polistirena. Keesokan harinya, buang larutan ke dalam lubang dan basuh 3 kali dengan penimbal pencuci selama 3 minit setiap kali.

(secara ringkasnya, basuh, sama di bawah). 2. Tambah sampel: Tambah pencairan tertentu sampel yang akan diuji 0.1 ml dalam lubang tindak balas berpaket yang disebutkan di atas-, eramkan selama 1 jam pada 37 darjah C. Kemudian basuh.

(Pada masa yang sama buat lubang kosong, lubang kawalan negatif dan lubang kawalan positif). 3. Tambah enzim-antibodi berlabel: Dalam setiap lubang tindak balas, tambah enzim yang baru dicairkan-antibodi berlabel (pencairan selepas pentitratan) 0.1 ml.

Inkubasi 0.5 hingga 1 jam pada 37 darjah C dan basuh.

4. Tambah paparan warna cecair substrat: tambah penyediaan sementara larutan substrat TMB 0.1 ml, 37 darjah C 10 hingga 30 minit dalam setiap lubang tindak balas.

5. Tindak balas tamat: Tambah asid sulfurik 2M 0.05 ml pada setiap lubang tindak balas. 6. Keputusan menentukan: boleh pada latar belakang putih, secara langsung dengan mata kasar untuk memerhatikan keputusan: semakin gelap warna di dalam lubang tindak balas, semakin kuat tahap positif, tindak balas negatif tidak berwarna atau sangat cetek, mengikut warna yang dicerminkan dalam kedalaman, kepada warna yang ditunjukkan dalam kedalaman.

Nilai Od diimbas: pada penguji ELISA, pada 450nm (jika pemaparan warna BTS, maka 410nm), ke lubang kawalan kosong sifar ditelan untuk mengukur nilai OD setiap lubang, jika lebih besar daripada nilai OD kawalan negatif yang ditentukan sebanyak 2.1 kali, iaitu positif.

Undang-undang tidak langsung

1. Gunakan bungkusan yang akan ditimbal untuk mencairkan antigen yang diketahui kepada 1 hingga 10 mg/ml, setiap lubang ditambah 0.1 ml, 4 darjah C semalaman;

2. Basuh 3 kali keesokan harinya;

3. Tambahkan pencairan tertentu sampel (antibodi tidak diketahui) 0.1 ml dalam-lubang tindak balas berpaket yang disebutkan di atas, eramkan selama 1 jam pada 37 darjah C, basuh;

4. (kedua-dua kawalan lubang kosong, negatif dan positif) dalam lubang tindak balas, tambah label enzim yang baru dicairkan antibodi kedua (anti-antibodi) 0.1 ml;

5.37 darjah C pengeraman 35-60 minit, basuh;

6.'Kali terakhir anda mencuci dengan DDW. Langkah selebihnya adalah sama dengan "kaedah sandwic antibodi berganda" 4, 5, 6.